制作感受态细胞（INOUE法）
Inoue及其同事在1990年开发了该方法。它非常适用于克隆中常用的许多菌株。起初的方法要求在18°C下培养过夜的大肠杆菌培养物。我们发现如果它们在37°C下过夜生长也能得到很好的效果。或者，您可以购买即用型的化学感受态细胞或电感受态细胞，包括BL21（货号CMC0014）和SIG10（货号CMC0001）。商购的现成感受态细胞具有优势，因为它们的制备已经过优化，为独特应用提供具有高转化效率的特化细胞。
您将需要：
DMSO（二甲基亚砜）（货号D8418）
用于培养大肠杆菌的LB板用于培养过夜培养物的3×250 mL（货号H8032）用作起始培养物的额外SOB震动培养箱0.5 M PIPES(哌嗪-1,2-双[2-乙磺酸])pH 6.7（货号P8203）Inoue转化缓冲液无菌微量离心管无菌离心管，容量至少250 mL能够以2,500×g的力旋转这种管的离心机
热休克感受态细胞生产实验方案
第1天
从已孵育过夜的LB板中挑选单个大肠杆菌菌落。在含有菌落的50 mL管中接种2 ml SOB培养基的起子培养物，并在37℃下震动孵育约7小时。
制备或解冻Inoue转化缓冲液的等分试样。
接种含有250mL SOB培养基和三种不同体积的起子培养物的三个烧瓶，以确保其中一个在第二天早晨达到所需的OD。我们建议尝试10μL、50μL和250μL。将烧瓶在37°C下震动孵育过夜。
第2天
第二天早上读取所有三种培养物的OD600。继续监测OD600。
当其中一种培养物的OD600达到0.55时，将该培养物转移到冰水浴中10分钟。（开始冷却微量离心管。）
2,500 x g、4℃离心10分钟收获细胞。
倒掉上清液，将细胞转移到80 mL冰冷的Inoue转化缓冲液中轻轻重悬细胞。
2,500 x g、4℃离心10分钟回收细胞。
倒掉上清液，将细胞移液到10 mL冰冷的Inoue转化缓冲液中轻轻重悬细胞。
加入0.75 mL DMSO，旋转混合，将细胞在冰上静置10分钟。
将100μL等分的细胞悬液分配到冰冷的微量离心管中。
将等分的感受态细胞分批放入液氮中快速冷冻。
将等分试样储存在-80°C冰箱中直至需要。
该配方设计用于制备约50-60个Luria-Bertani（LB）琼脂板，用于用标准质粒培养大肠杆菌。或者，您可以购买预先测量的EZ-Mix™形式LB琼脂，货号L7533。
10 g胰蛋白胨（货号T2559)
5 g酵母提取物（货号Y1625，Y1626）10 g NaCl（货号S3014）15 g琼脂粉（货号L2897）用水定容至1升
量出上面的量，添加到带有良好工作盖的1升的瓶子（见下文）。加入干净的去离子水（理想情况下至少18兆欧）。拧紧盖子，摇动混合液体和粉末，不要希望完全溶解，但只要瓶底没有粉末，且液体里没有成团粉末就行。如果没有适当混合，瓶底粉末可能会被烤干。拧松盖子约半圈，缠上高温高压灭菌带，然后高温高压灭菌。
高温高压灭菌后，确保盖子完全拧紧，请勿冷却到45-50度以下。琼脂通常会在40度左右凝固。我们的经验是，如果拿起来不烫手，即可以倒出了，而且实际可能已经太凉了。当琼脂太热时，请勿添加抗生素，否则会影响抗生素的稳定性和半衰期，特别是氨苄西林。加入适量的抗生素（见下文），轻轻旋转混合。避免有气泡，因为这会导致培养板含有气泡或不均匀。每个板大约浇注12-15mL（货号Z617636）。一种简单的方法是将板子摞起来，大的截面（盖子）竖起来。拿着最底下那块板的盖子将摞在一起的所有板子提起来，用另一只手倒琼脂。倒入足够充满底部的量，然后再多倒一点。然后将这摞板放下，然后拿着这摞板的第二个盖子将这摞板子提起进行浇注。这样做看起来很不均匀，但随着时间推移，这其实非常可再现。
或者，您可以购买含有或不含抗生素的现成的LB琼脂板：
LB琼脂板（货号L5542）
含有氨苄霉素的LB琼脂板（货号L5667）
含有卡那霉素的LB琼脂板（货号L0543）
含有羧苄青霉素的LB琼脂板（货号L0418）
含有四环素的LB琼脂板（货号L8795）
提示1：许多实验室瓶子都有蓝色或透明的塑料突边，它们有可能缺失或被火烧焦。当浇注板时，这些蓝色突边防止琼脂从瓶壁流下，并在高温高压灭菌后保持气密。确保突边完好无损。
提示2：1升是相当多的琼脂和抗生素，可按您的需要缩小配方。我一般每次制作0.5升（约30个板）。
抗生素浓度：
在水中制备原液：每1 mL培养基添加1µl卡那霉素（货号K4000）—原液50mg/mL，终浓度50µg/mL
氨苄霉素（货号A9518）—原液100mg/mL，终浓度100µg/mL链霉素（货号S6501）—原液50mg/mL，终浓度50µg/mL奇霉素（货号S9007）—原液100mg/mL，终浓度100µg/mL
在乙醇中制备原液：每ml培养基添加5µl氯霉素（货号C0378）—原液34mg/mL，终浓度170µg/mL
四环素HCL（货号87128）—原液10mg/mL，终浓度50µg/mL
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