你知道细胞与细胞之间也会互相交流的吗？
就像人与人在合作时需要进行交流，细胞也要告诉彼此what and how?
那“密语”是什么？
这些“密语”就是分泌性蛋白
分泌性蛋白是指分泌到细胞膜上/外的蛋白质。分泌性蛋白通过内分泌、旁分泌 、自分泌等途径发挥它们各自的作用。
其中一类旁分泌蛋白—细胞因子、调节因子、信号肽等生物活性分子，积极参与疾病的免疫调节与治疗，也是当下肿瘤药物研究中最热门的研究方向之一。
Erick Armingol., Nature Reviews Genetics volume 22, pages71–88 (2021)
而在药物研发的早期阶段，完成靶点筛选后，通常会在细胞学层面进行实验。
于是，体外药效实验也因此诞生了！在体外进行抗体药的筛选和功能性检测是抗体药早期发现非常关键的一步，这直接决定了这些抗体药的命运。
一方面从细胞学层面评价药物的有效性是否符合预期，一方面测试药效计量，为后期动物实验提供参考数据。药物体外药效试验中，细胞外泌蛋白表达量是常规检测指标，来评估细胞被激活的水平。
下面就让我们跟随顶级期刊【Science】上的一篇文章，看看体外药效试验该如何设计吧
No.1 p53基因介绍
p53 基因是人体内最重要的抑癌基因之一，可以维持基因组的稳定性；它的突变，与很多癌症的发生有关。目前市面可见的抗癌药物，还没有针对突变型 TP53 的药物被批准用于治疗含有这些突变的肿瘤患者。作者以TP53为靶点，生产出靶向 TP53 突变基因的双特异性单链抗体（scDb），一端靶向TP53，一端靶向CD3。作者通过双特异性抗体的筛选、人瘤细胞体外实验、模型小鼠体内实验三个方面，证明TP53双抗，有效识别癌细胞，并激活 T 细胞，发挥抗肿瘤效应。
No.2 体外药效实验思路
通过构建稳定的细胞共培养体系后，将筛选出来的双特异性抗体与肿瘤细胞，分选后的T细胞进行共培养测试。
通过不同的组别设计，培养期间连续取样，检测细胞培养上清中旁分泌蛋白的表达量，从因子表达水平层面，来测试T细胞激活情况。
同时采用实时显微技术，实时观察并记录肿瘤细胞的凋亡情况，从细胞学层面，进一步验证双特异性抗体药物的抗肿瘤能力。
体外药效结果一：随着时间的增加，细胞培养上清中Perforin, Cytotoxicity, Granzyme B, IFNg, TNFa, IL-2等浓度不断增加，表明，T细胞被激活，免疫杀伤能力被开启。
体外药效结果二：在双特异性抗体药物和T细胞存在的情况下，肿瘤细胞增殖被抑制，数量不断减少；表明，在体外实验条件下，药物具有很好的抑制肿瘤效果。
那这次文章是用什么技术来检测的呢？
答案来了，本文章中，体外细胞因子检测过程中，作者使用Milliplex Human CD8+ T cell（货号：HCD8MAG-15K）和Human High Sensitivities T cell（货号：HSTCMAG-28SK）两款试剂盒，重点检测了Perforin, Granzyme B, IFNg, TNFa, IL-2这5个因子，验证T细胞的激活水平。
默克MILLIPLEX 多重蛋白检测技术，是经过长期验证的稳定的多因子检测技术平台，仅需25μl样本即可实现百种蛋白的同步检测，大大节约检测样本、时间、人力和经费支出。现已覆盖人、大鼠、小鼠、非人灵长类等11大物种，除此之外，默克还提供灵活的试剂盒定制服务，满足更多因子组合的研究应用需求。
每一篇高分文章都是由很多基础实验组合而成的；创新的Idea，合理的实验设计，高效的实验方法，往往可以收获高于预期的实验数据和结果。
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