免疫组化染色是检测组织中特定抗原的有用工具。为了实现标准染色，在组织切片脱蜡并水化后进行一抗孵育，然后再使用酶偶联的二抗，加入酶特异性底物之后便可观察到特异性染色。偶然情况下可能观察不到染色或染色结果很弱，可能需要使用酶消化来对抗原进行修复。
下面的操作流程描述了对福尔马林固定石蜡包埋组织切片使用过氧化物酶或碱性磷酸酶偶联物免疫组化标记的应用。
试剂和设备
在下表的材料表中可找到许多此类产品。
福尔马林固定石蜡包埋组织切片
0.01 M磷酸盐缓冲液，pH 7.4(PBS)（货号P3813或P4417-片剂）
牛血清白蛋白（BSA）（货号A9647）
稀释液：1%BSA的PBS溶液（货号P3688）
二甲苯（货号247642或534056）
无水乙醇（货号32221（仅限欧洲）或E7023）
0.1%胰蛋白酶PBS溶液（货号T7409）或4mM胰蛋白酶片剂（货号T7168）CaCl2溶液，200 mm Tris，pH 7.7，或0.1%蛋白酶（货号P5380）PBS溶液。
微波抗原修复液：10 mM柠檬酸钠（货号C8532）缓冲液，pH 6.0；1 mM EDTA(货号ED4SS)，pH 8.0
一抗
选项1：生物素标记二抗及ExtrAvidin-过氧化物酶（货号
E2886）或ExtrAvidin-碱性磷酸酶(E2636)或选项2：偶联过氧化物酶或碱性磷酸酶的二抗
使用过氧化物偶联二抗或ExtrAvidin-过氧化物酶：3%过氧化氢（用30%储存液以及去离子水新鲜制备）。
酶底物：取决于酶及所需颜色（参见“底物”部分）。
对于过氧化物酶：AEC染色试剂盒（货号AEC101），DAB（货号D4418或D0426）.
使用碱性磷酸酶时：Fast Red TR/Naphtol AS-MX（货号B5655）。
梅氏苏木精（货号MHS1）
Coplin染色缸（货号S5641）
微波炉
显微镜
IHC操作步骤
制片
一抗反应
二抗反应
底物制备
显色
复染
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