制定PCR或RT-PCR故障排除方案
错误潜在来源和/或操作员人为错误问题
操作员出错的可能性很多。通常无法确认这些错误的原因。所有故障排除流程的第一步是检查实验方案，然后重做实验。检查实验方案（参见附录A，本指南的实验方案），甚至要求同事（最好是经验丰富的分子生物学家）审查实验计划，是相当重要的做法。一位博士后研究员在运行PCR多次失败后，意识到PCR预混试剂缺少dNTPs，这个警示性故事提醒我们，即使是最优秀的科学家在过度工作后，也非常容易犯简单的错误。
预混试剂
反应组分预混试剂的错误或问题可能是所有样品和阳性对照中扩增彻底失败的根源。在重做实验之前，应检查所有组分以及浓度。如果正要使用新的一批试剂，那么在开始进行一系列重大实验之前，应先对照运行新试剂和原试剂，这是非常有效的预防措施。
在转换预混试剂时，必须认识到有些检测对缓冲液组分/退火温度(Ta)/引物浓度特别敏感。更改其中任何一项都可能会导致不同性能。因此，在进行重大改变之前，应在选定的预混试剂和所需的所有仪器上验证所有测定。查看每种预混试剂的说明书也很重要，因为说明书给出了针对给定的酶、热启动机制和缓冲液组分优化的推荐条件。
良好的实验室操作规范要求确保为所有要混合的样品制备充足的反应预混试剂。确保将所有组分小心解冻并充分混合，且在等分至样品之前，将实验预混试剂彻底混合均匀。这对于某些2×缓冲液特别重要，例如比普通PCR缓冲液更粘稠的KiCqStart®。
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